赛默飞Qubit4荧光分光光度计样本浓度超出范围怎么办

Qubit 4 荧光计显示“样本浓度超出范围"，通常是指样本浓度过高或过低，超出了当前所用试剂盒的检测范围。

一、先确认是“过高"还是“过低"

仪器屏幕会给出提示，你需要先看清楚是“浓度过高 (Too High)"还是“浓度过低 (Too Low)"。

1、浓度过高 (Too High)：样本浓度超出了试剂盒检测上限。

2、浓度过低 (Too Low)：样本浓度低于试剂盒检测下限。

二、解决方法

1、如果浓度过高 (Too High)

稀释样本：这是常用的方法。用试剂盒中提供的缓冲液 (Buffer) 稀释样本。注意不要用水稀释。稀释后，在软件中输入稀释倍数，仪器会自动计算原始浓度。

（1）减少样本体积：在保持总体积不变（如200 µL）的情况下，适当减少样本加入量。例如，将样本体积从2 µL减至1 µL。

（2）更换试剂盒：如果样本浓度远高于当前试剂盒上限（如dsDNA HS上限100 ng/µL），可换用检测范围更宽的BR试剂盒（如dsDNA BR上限2000 ng/µL）。

2、如果浓度过低 (Too Low)

（1）增加样本体积：在保持总体积不变（如200 µL）的情况下，适当增加样本加入量。Qubit 4的最大上样体积为20 µL。

（2）更换试剂盒：如果样本浓度低于当前试剂盒检测下限（如dsDNA BR下限2 ng/µL），可换用灵敏度更高的HS试剂盒（如dsDNA HS下限0.2 ng/µL）。

三、预防建议

为了避免反复出现该问题：

1、了解检测范围：不同Qubit试剂盒的线性范围不同。以下是常用试剂盒的参数，供你参考：

（1）dsDNA HS Assay：0.2 - 100 ng

（2）dsDNA BR Assay：2 - 2000 ng

（3）RNA HS Assay：0.5 - 100 ng

（3）RNA BR Assay：5 - 1000 ng

2、做好预实验：若不确定样本浓度，可用NanoDrop等仪器进行预判，或先用少量样本测试，再确定合适的稀释倍数。

3、规范操作：确保所有试剂和样本在室温下平衡，反应液充分涡旋混匀并短暂离心去除气泡。