thermofisher赛默飞quantstudio1实时荧光定量PCR做实验用哪些染料？

QuantStudio 1是一个灵活的平台，支持多种化学检测方法。总的来说，可以分为两大类：DNA结合染料 和水解探针。

一、赛默飞QuantStudio1实时荧光定量PCR系统DNA结合染料

这类染料可以嵌入任何双链DNA分子中，发出荧光，因此是一种非特异性的检测方法。它成本较低，但无法区分特异性产物和非特异性产物（如引物二聚体）。

1、SYBR Green I：这是经典、常用的DNA结合染料。当它与双链DNA结合后，荧光信号会大大增强。实验结束后，需要通过熔解曲线分析 来确认扩增产物的单一性。

2、EvaGreen：一种对PCR抑制更小、稳定性更好的染料，尤其适合高分辨率熔解曲线分析。

二、赛默飞QuantStudio1实时荧光定量PCR系统水解探针

这类方法利用一个序列特异性的探针，因此是特异性的检测。它通过荧光共振能量转移原理来工作，只有在扩增出目标序列时才会报告荧光信号，特异性高，适合进行多重检测（同时检测多个目标）。

1、TaqMan 探针：这是赛默飞世尔科技（Applied Biosystems）的技术，也是与QuantStudio系统最“原配"的探针化学方法。在探针的5‘端带有一个报告荧光基团，在3’端带有一个淬灭基团。

2、TaqMan探针常用的染料组合非常丰富，可以分为以下几类：

（1）经典的组合是 FAM（报告基团） 搭配 TAMRA 或 MGB-NFQ（淬灭基团）。

（2）现在主流、效果好的是使用MGB探针，其淬灭基团通常是非荧光淬灭基团，能获得更低的背景和更高的信噪比。例如：FAM-MGB-NFQ。

注意：在设置多重实验时，必须确保您仪器配置的光源和滤光片组支持您所选择的染料组合。QuantStudio 1的标准配置通常支持FAM、VIC、ROX等常见染料。

三、总结建议

1、查看仪器配置：首先确认您的QuantStudio 1具体配置了哪些激发光源和检测滤光片，以确保您选择的染料能被仪器识别。

2、实验目的决定方法：

（1）如果只是看某个基因的表达量变化，且预算有限，SYBR Green 是重要选择。

（2）如果需要进行高精度的定量（如病毒载量），或检测高度同源的序列，或在一个样本中同时检测多种病原体，请选择TaqMan探针。

3、使用预混液：强烈建议使用赛默飞配套的预混液，如 PowerUp SYBR Green Master Mix (用于SYBR Green法) 或 TaqMan Universal Master Mix (用于TaqMan探针法)。这些预混液已经优化好，包含了除引物、模板和探针外的所有成分，能保证实验的稳定性和重复性。