eppendorf艾本德5810台式微量离心机使用操作案例

艾本德 Eppendorf 5810是一款非常经典且功能强大的台式高速离心机。它结合了大容量和高速的特点，并带有制冷功能，广泛应用于分子生物学、细胞生物学、生物化学等实验室。下面我将为您提供一个详细的操作使用案例，以“从哺乳动物细胞培养上清中提取外泌体"这一常见实验为例，展示其标准操作流程和注意事项。

一、艾本德5810台式离心机操作步骤

1、第1步：开机与预冷

（1）开机： 按下离心机正面右下角的电源开关。

（2）预冷：

由于外泌体提取需要在低温下进行，必须开启制冷。

点击屏幕上的 “Temp" 按钮，使用数字键盘输入目标温度 4°C，然后按 “Enter" 确认。

此时离心机腔体开始降温。等待腔体温度稳定在4°C后再进行离心。（小技巧：可以提前半小时开机预冷）

2、第2步：低速离心去除大颗粒杂质

（1）平衡：

将装有细胞培养上清的50mL离心管两两配对，确保重量平衡。（关键步骤：重量差必须 < 0.1g）

用天平精确称重，如果不平衡，用PBS或上清液进行调整。

（2）放置样本： 将平衡好的离心管对称地放入转子中。

（3）参数设置：

转速/离心力： 按 “Speed" 键，输入 2000，然后按屏幕提示切换单位至 “× g"，按 “Enter"。

温度： 已设为 4°C。

时间： 按 “Time" 键，输入 30，然后按 “Enter"（单位：分钟）。

加速/减速档位： 按 “Accel" 和 “Decel" 键，为保护沉淀，通常设为中等或低速档，如 “5" 和 “5"。

（4）启动离心：

关紧离心机盖。

按绿色的 “Start" 按钮。离心机将开始运行。

（5）结束处理：

运行结束后，会发出“嘀"声。转子会缓慢停止。

不要立即打开盖子！ 等待转子停止后，再打开盖子。

小心取出离心管，将上清液小心转移至新的50mL离心管中，避免吸到管底的沉淀。弃去沉淀。

3、第3步：高速离心浓缩外泌体

（1）重复平衡： 将转移后的上清液再次进行两两平衡。

（2）参数设置：

转速/离心力： 设为 10,000 × g。

温度： 4°C。

时间： 60 分钟。

加速/减速： 同样设为 “5" 和 “5"。

（3）启动离心： 同第2步。离心结束后，小心弃去上清，管底可见的少量沉淀即为粗提的外泌体。

4、第4步：超高速离心最终纯化外泌体（100,000 × g - 此步骤需使用超速离心机，此处为演示5810R的极限操作）

（1）注意： 5810R 的MAX 相对离心力（RCF）取决于所使用的转子。对于外泌体提取，通常需要 >100,000 × g 的离心力，这通常需要使用超速离心机。

（2）本例演示： 假设我们使用 5810R 兼容的MAX 速转子（如固定角转子 F-35-6-30，MAX 20,200 × g），我们可以进行一个“类超离"步骤来进一步纯化。

（3）参数设置：

用少量PBS重悬上一步的沉淀。

转速/离心力： 设为 20,200 × g（该转子的MAX 限速）。

温度： 4°C。

时间： 90 分钟。

加速/减速： 设为高档 “9" 和低档 “1"，以快速达到速度和轻柔停止，防止沉淀重悬。

（4）启动离心： 同前。结束后，管底会有一个非常紧实的沉淀，即为较纯的外泌体。小心弃去全部上清，用适量PBS重悬沉淀，-80°C保存。

5、结束工作

离心结束后，取出所有样本和转子（如果需要）。

用软布擦拭离心机腔体和转子，保持清洁干燥。

关闭离心机电源。

二、关键注意事项与技巧

1、平衡是重要要务！ 不平衡会导致离心机剧烈震动，损坏转轴和转子，甚至发生严重事故。

2、正确选择转子与离心管：

（1）确保所使用的转子与离心管是 Eppendorf 认证或兼容的。

（2）注意转子的MAX 速度/离心力限制，不要超速使用。在设置参数时，5810R 的智能系统会自动根据安装的转子限制MAX 速度。

3、规范开关盖：

（1）离心机运行时和转子未停止前，严禁打开盖子。

（2）关盖时，应轻轻推至闭合，不要用力撞击。

4、制冷功能的使用：

（1）若需在4°C离心，务必提前预冷。

（2）若在室温离心，可关闭制冷功能以节约能源和减少压缩机磨损。

5、加速/减速档位的选择：

（1）加速档 (Accel)： 对于不易分层的样本或对沉淀无特殊要求时，可用高档（如9）以节省时间。对于梯度离心或怕打散沉淀的样本，用低档（如3-5）。

（2）减速档 (Decel)： 对于松散的沉淀，使用低档（如1-3）可以防止制动过快将沉淀冲散。对于紧实沉淀或无要求时，可用高档（如9）以快速停止。

6、日常维护：

（1）定期检查转子是否有腐蚀或裂痕。

（2）定期清洁腔体，防止样本泄漏腐蚀机器。

通过以上案例，您应该能够掌握艾本德 5810R 离心机的基本操作逻辑和核心要点。请务必在实际操作前仔细阅读用户手册，并在有经验人员的指导下进行。