选择赛默飞StepOnePlus实时荧光定量PCR需要了解哪些关键参数？

选择StepOnePlus™实时荧光定量PCR系统时，需要了解以下几个关键参数，以确保它能够满足您的实验需求。这些参数可以分为两大类：系统硬件性能参数和实验应用相关参数。

一、赛默飞StepOnePLus实时荧光定量PCR系统性能参数

1、检测通道和滤光片

（1）关键点：StepOnePlus是四色通道系统。这意味着它可以同时检测最多四种不同的荧光信号。

（2）检测方法：如果您使用TaqMan探针（如FAM, VIC）或SYBR Green染料法，需要确认染料/探针的荧光基团是否与仪器的滤光片波长匹配。StepOnePlus的标配通道通常能覆盖FAM, SYBR Green, VIC/JOE, NED/TAMRA/Cy3, ROX™等常用荧光基团。

（3）多重检测能力：如果您需要在一个反应孔里同时检测多个靶基因（多重PCR），四通道的限制就很重要。例如，一个通道用于内参基因，那么最多还能检测三个目标基因。

2、通量

（1）关键点：StepOnePlus采用96孔板标准格式。

（2）样本数量：您一次实验最多需要运行多少个样本？包括标准品、待测样本、阴性对照等。96孔板除去对照，通常一次运行可处理80-90个样本。

（3）实验规划：如果您的样本量经常接近或超过96个，可能需要考虑更高通量的仪器（如Applied Biosystems 384孔或更高通量的系统），或者接受分批次运行，这会增加时间和试剂成本。

3、动态范围

（1）关键点：指仪器能够准确定量从低浓度到高浓度模板的范围，通常用数量级表示（例如，10个数量级）。

（2）需要了解：StepOnePlus具有很宽的动态范围（通常可达10个数量级），这对于准确量化拷贝数差异巨大的样本（如病毒载量检测、基因表达高低悬殊的样本）至关重要。

4、灵敏度

（1）关键点：指仪器能够检测到的低模板拷贝数。

（2）需要了解：如果您的研究涉及痕量核酸的检测（如微量病原体、低丰度基因表达、循环肿瘤DNA等），高灵敏度是首要考虑因素。StepOnePlus的灵敏度很高，通常可以检测到单拷贝的模板。

二、赛默飞StepOnePlus实时荧光定量PCR实验应用相关参数

1、温控系统和升温速率

（1）关键点：StepOnePlus使用半导体帕尔贴技术进行温控。

（2）温控精度和均一性：这直接影响PCR扩增的效率性和特异性，确保所有反应孔的条件一致，结果可靠。

（3）升温速率：更快的升温速率可以缩短实验周期。StepOnePlus的速率属于标准水平，适合绝大多数常规qPCR实验。如果您对实验速度有高要求，可以考虑更快速的机型。

2、软件功能和分析能力

（1）关键点：配套的StepOne™ Software是操作仪器和分析数据的核心。

（2）用户界面：是否易于上手，进行程序设置、板面定义和运行监控。

（3）数据导出：能否方便地将原始数据（Ct值等）导出到其他专业分析软件（如Excel, GraphPad Prism）进行进一步处理。

3、兼容性

（1）关键点：仪器对耗材和试剂的兼容性。

（2）耗材：是否必须使用原厂的昂贵PCR板/盖膜，还是兼容其他品牌的低成本耗材（需确认光学兼容性）。

（3）试剂：系统是开放式的，可以使用任何品牌的qPCR试剂（TaqMan或SYBR Green），这给了您更大的选择和成本控制空间。

三、总结选择建议

StepOnePlus是一款非常成熟、稳定且用户友好的中端qPCR仪。它非常适合以下用户：

1、进行基因表达分析、病原体检测、SNP分型等常规qPCR实验的学术实验室或临床检测实验室。

2、样本通量在96孔板范围内。

3、注重实验结果的准确性和重复性。

4、希望平衡仪器性能与长期使用成本。

在选择前，能结合您的具体实验需求，与供应商的技术支持详细沟通，甚至可以要求进行样本测试，以最直观地验证StepOnePlus是否满足您的要求。