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水盘污染是细胞培养中一个隐蔽但破坏性较强的风险源。在37°C、高湿的二氧化碳培养箱内，水盘为微生物提供了理想的繁殖环境，一旦形成生物膜，就会持续向箱内释放污染物，威胁整个培养体系。
一、生物膜的形成机制与危害
1、形成过程
生物膜的形成是一个分阶段的过程：微生物首先在水盘表面附着（1-2小时内），随后分泌胞外聚合物（EPS）将自身包裹，最终在24-72小时内发育为成熟的生物膜结构。
2、核心危害
成熟生物膜中的微生物对消毒剂的耐受性远高于浮游状态，常规的擦拭和换水难以将其清除。这意味着，一旦生物膜形成，它就会成为一个持续性的污染源，不断向箱内环境释放微生物。
3、污染扩散途径
水盘中的污染物主要通过以下方式扩散到整个培养箱：
（1）气溶胶传播：开门时，箱内外温差引起空气流动，扰乱水面，将含微生物的微粒扬入空气中，沉降到培养物表面。研究显示，开门10-15秒就足以使空气中微生物浓度显著上升。
（2）冷凝水桥接：高湿度环境下，培养瓶盖等较冷表面会形成冷凝水，可能形成“液桥"，为污染物进入培养物提供通道。
二、水盘的清洁与消毒流程
建议建立每周一次的全套清洁维护周期。
1、清洁前准备
关闭培养箱电源和CO₂气源，取出水盘及所有可拆卸的搁板、支架。在通风橱内操作，并佩戴手套和护目镜。
2、水盘清洁与消毒
（1）倒掉旧水，用软布蘸取温和中性洗涤剂清洗水盘内部，避免使用钢丝球或硬毛刷刮伤不锈钢表面。
（2）用去离子水冲洗干净后，用70%乙醇擦拭消毒，等待自然晾干或用无菌布擦干。
（3）若需更强效的消毒，可使用H2O2或专用培养箱清洁剂。
3、箱体清洁
用浸有70%乙醇的无尘布擦拭箱体内壁、门封条、玻璃门及搁板支架。门封条的褶皱处是霉菌滋生的重点区域，需要翻开仔细擦拭。
4、去除残留
所有消毒步骤完成后，打开箱门通风15-30分钟，确保乙醇等消毒剂挥发。残留的消毒剂蒸汽会影响CO₂传感器的读数准确性。
5、恢复使用
将所有干燥的配件装回，加入足量无菌水。重新开机后，建议空载运行至少12小时，待温度和CO₂浓度稳定后再放入细胞样品。
三、长效预防策略
1、用水选择
必须使用无菌蒸馏水或去离子水，切勿使用自来水。自来水中的矿物质会形成水垢，为微生物提供营养和附着位点。
2、添加抑菌剂
在水盘中按比例加入专用的水盘抑菌剂，可以持续抑制微生物生长，显著降低清洁频率。这是目前高效的主动预防手段。部分抑菌剂可维持水盘无菌状态长达一周，对顽固真菌也有很强的抑制作用。
3、定期更换与深度灭菌
（1）建议每周更换水盘中的无菌水，更换时同步清洗擦拭水盘。
（2）如果BB150选配了90°C湿热消毒（ContraCon）模块，可定期运行此程序进行深度灭菌。该程序可对包括水盘在内的整个内腔进行消毒，无需单独取出组件，全程约需25小时（加热25h、消毒23h、冷却14h、后加热3h）。
4、日常操作规范
（1）减少开门频率和时长，随开随关。
（2）放入培养箱前，用酒精擦拭培养瓶外表面。
（3）合理摆放物品，避免过度拥挤影响空气流通。
四、污染发生后的处理
一旦发现水盘污染（液体浑浊、变色、内壁滑腻），应立即启动应急处理：
1、隔离与清除：立即取出水盘，倒掉污染水，高压灭菌处理。同时丢弃所有疑似污染的培养物。
2、清洁消毒：按照上述清洁流程，对水盘和整个箱体进行深度清洁和消毒。
3、运行灭菌程序：如果条件允许，运行90°C湿热消毒程序，杀灭残留的微生物和生物膜。
4、排查根源：检查用水质量、抑菌剂是否失效、清洁频率是否足够，从根本上杜绝再次污染。
五、总结
水盘污染防控的核心在于主动预防优于被动处理。通过选用无菌水、添加抑菌剂、坚持每周清洁和定期深度灭菌，可以有效阻断生物膜的形成，确保培养箱内环境的洁净与稳定。
