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细胞培养总是污染,排查了一圈却找不到原因?水盘确实是赛默飞371培养箱最容易被忽视、也最致命的污染源头。
一、为什么水盘是“万恶之源"?
371培养箱依靠底部水盘的自然蒸发来维持高湿度(约95%),这为微生物创造了一个恒温37°C、高湿且营养丰富的“温泉",细菌和真菌极易在此大量繁殖。
关键的是,一旦水盘被污染,微生物会随着水蒸气循环扩散到整个箱体,包括你的培养瓶、内壁和搁板,导致“全军覆没"。污染通常源于以下操作:
1、使用了非无菌水:直接加入自来水或未经灭菌的纯水,本身就带入了大量微生物。
2、长期不更换:水盘变成了微生物的长期培养皿。
3、清洁不到位:只换水,没有擦拭水盘内壁,残留的微生物会迅速再生。
二、 三步清洁法,照着做
1、断电与准备
关闭电源,取出箱内所有搁板、水盘等可拆卸附件。如果接下来要做140°C高温灭菌,务必取出水盘、HEPA滤膜和IR传感器(TC传感器可留在原位)。
2、清洁与消毒水盘
(1)倒掉旧水,用中性清洁剂或70%酒精擦拭水盘内壁。
(2)如有水垢,用5%柠檬酸溶液清洗后,用无菌水冲净。
(3)有条件的话,将水盘高压灭菌(121°C, 20分钟),这是有效的消毒方式。
3、更换无菌水并复位
(1)注入无菌蒸馏水或去离子水至水位线(约1/2至2/3体积)。切勿使用自来水。
(2)为增强抑菌效果,可在水中加入专用抑菌剂,或0.02%叠氮钠(夏季防真菌),也可使用硫酸铜溶液(20g无水硫酸铜+5ml浓硫酸+1L灭菌纯水)。
(3)将水盘平稳放回箱体底部原位。
三、更换周期:多久一次才安全?
水盘维护的核心在于“定期",而非“按需"。
1、换水频率:每周必须更换一次无菌水并重新添加抑菌剂。
2、深度清洁:每周清洁水盘内壁;每月对水盘和箱体进行一次清洗消毒。
3、HEPA过滤器:建议每6-12个月更换一次,确保空气净化系统有效。
四、如果污染已经发生
如果水盘已出现严重污染或生物膜,完成上述清洁步骤后,建议使用Spor-Klenz等强效杀孢子剂进行深度消毒。切勿使用84消毒液,它会腐蚀培养箱的金属部件。