biorad伯乐Trans-Blot Turbo蛋白转印系统离子强度过高

Bio-Rad Trans-Blot Turbo 系统出现离子强度过高（通常报错信息为 “High Load"、“Conductivity too high" 或转印时电流/功率远超设定值，甚至自动中止）—— 这正好与之前“No Load"相反，代表电路负载过大，即转印体系的导电性太强，导致电流异常升高。

一、主要原因与解决步骤

1、转印缓冲液（Transfer Buffer）离子浓度过高

（1）根本原因：Trans-Blot Turbo 使用低离子强度的专用缓冲液（通常电导率 < 2 mS/cm）。若误用了传统湿转的高离子缓冲液（如含 25 mM Tris、192 mM 甘氨酸的普通转印液），电导率会高出 5-10 倍，引起过流报警。

（2）解决办法：

使用原装耗材：Bio-Rad Trans-Blot Turbo 专用转印包（内置缓冲液，已优化离子强度）。

若自己配制：必须使用 Trans-Blot Turbo 专用缓冲液配方（如 5× 浓缩液需稀释到 1×，电导率约 1.2 mS/cm）。禁止使用传统 Towbin 缓冲液（Tris-甘氨酸）或任何含高浓度盐（如 PBS）的溶液。

紧急处理：如果已经加错，用去离子水稀释 5-10 倍（会削弱转印效率，但可避免报警）。理想做法是重新配制。

2、凝胶或样品中盐分过高

（1）样品上样缓冲液（Loading Buffer）含高浓度 SDS、EDTA、NaCl，或凝胶未充分洗涤、含残留的聚合盐（过硫酸铵等）。

（2）解决办法：

转印前清洗凝胶：将凝胶在 去离子水 中漂洗 30 秒（两次），再放入转印包。

使用 低盐样品缓冲液：如果样品必须高盐，减少上样体积，或在转印前用 1× 专用缓冲液平衡凝胶 5 分钟。

3、 转印包（Transfer Pack）问题

（1）包内液体蒸发浓缩：过期或包装破损的转印包，水分蒸发后盐浓度升高。

（2）误用非原装/自制转印包：有些用户自制海绵+滤纸+自配缓冲液，缓冲液离子强度无法准确控制。

（3）解决办法：

换一盒 全新的、未过期的原装转印包（注意检查外包装是否密封完好）。

不要向转印包额外添加任何液体（包括水、缓冲液）。

4、卡盒内金属触点短路或被污染

（1）如果有残留的转印液或盐结晶连接了正负极金属片，会形成低电阻通路，导致仪器检测到过高电流。

（2）解决办法：

拆下卡盒，用 75% 酒精或去离水清洗所有金属接触片（包括卡盒内部和主机插槽的弹片）。

用棉签擦净缝隙，晾干后再使用。

5、转印程序参数设置错误

（1）自定义程序中设定了 过高的电压上限（如 >25 V）或 恒压模式，而仪器默认使用恒流模式（通常 1.3 A 恒定）。若误设为恒压且体系电导率高，电流会飙升超过 2.5 A 触发保护。

（2）解决办法：

恢复出厂程序：使用内置的 Turbo 或 Mix 标准程序（例如：1.3 A, ≤25 V, 7-10 分钟）。

不要手动调整电压上限低于 25 V；不要使用“User Defined"中的异常参数。

二、快速诊断流程

1、刚按 Run 就报错 High Load

原因：卡盒内部短路 / 转印包内液体太浓

处理：① 清洁触点；② 换新转印包

2、运行几秒后电流持续 >2.5 A 并报警

原因：缓冲液盐度过高

处理：① 用去离子水稀释转印包（吸出旧液再补？不可取，直接换新）；② 清洗凝胶

3、同一转印包在另一台机器正常

原因：主机电流检测电路故障

处理：联系伯乐售后

4、用原装新包仍报错

原因：主机或卡盒硬件问题

处理：换卡盒测试；若一样，维修主机

三、重要注意事项

1、不要尝试降低程序电流（例如设为 0.5 A），那样转印效率极低且可能仍报错。必须从耗材/缓冲液源头解决离子强度问题。

2、如果急需转印：可将凝胶和膜装入湿转夹，用传统湿转装置（如 Mini Trans-Blot Cell）完成，但注意 Turbo 系统不适用于高离子强度环境。

3、长期预防：始终使用 Trans-Blot Turbo 专用试剂盒（Cat# 1704150 配套的转印包），并确保凝胶在转印前用去离子水轻洗。