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伯乐(Bio-Rad)Mini-PROTEAN Tetra(货号1658001)小型垂直电泳系统出现条带“歪斜"(如条带呈“/"或“\\"形、边缘翘起,而非水平的“—"形),通常是电泳物理组装或胶体聚合环节出了问题。请按以下优先级排查:
一、玻璃板与胶垫密封不严(漏液)
1、现象:条带整体向一侧倾斜,且同一侧的几个泳道歪斜程度一致。
2、原因:制胶时,两侧的厚垫片(spacer)与玻璃板间有微小缝隙,导致凝胶聚合时浓缩胶与分离胶界面不平(一侧高、一侧低)。
3、解决:
(1)制胶前,确保两块玻璃板底部对齐,卡紧制胶架,底部密封垫无老化变形(如老化需更换,货号1658038)。
(2)灌注分离胶后,立即用正丁醇或水封平,确保液面绝对水平。
(3)若已有歪斜胶,需重制,无法通过后续操作矫正。
二、电极芯(电极架)安装问题
1、现象:条带呈弧形(如“微笑"状)或内外侧歪斜方向相反。
2、原因:内槽电泳缓冲液泄漏,导致凝胶上下形成离子浓度差,电场不均。
3、解决:
(1)将电极芯单独拿出,检查底部密封圈是否完好。
(2)重新安装电极芯时,倾斜插入并确保绿色密封垫卡入玻璃板与电极芯的凹槽。
(3)灌满内槽液后,静置1分钟观察液面是否缓慢下降,若下降即漏液。
三、胶体聚合不均匀
1、现象:条带在某泳道突然变窄或扭曲,甚至单个泳道内部分辨率不均。
2、原因:TEMED或APS未混匀,局部聚合速度不同。
3、解决:配胶时涡旋震荡10秒以上,加TEMED后立即混匀灌注。
四、样品沉积不平
1、现象:所有条带朝同一方向均匀倾斜,但倾斜角度随电泳时间增大。
2、原因:电泳槽未放平。虽不常见于该机型(因其底部平),但若桌面或制冷槽不平仍会发生。
3、解决:用水平仪或目测放置平台,可在电泳槽一角垫纸调平。
五、梳子(comb)插入或拔出不当
1、现象:条带边缘模糊且有“拖尾"状歪斜。
2、原因:梳齿未垂直、匀速拔出,或拔出前胶未凝固,造成加样孔变形。
3、解决:胶凝固后(室温下分离胶20-30分钟),用去离子水或电泳缓冲液冲洗加样孔,并观察孔是否方正。
六、建议快速验证步骤
1、重制一块胶,严格注意玻璃板对齐、密封、液面水平
操作:若新胶正常 → 原胶问题
2、换另一套电极芯(若有)或借用邻台同型号
操作:若歪斜消失 → 原电极芯漏液
3、不跑样品仅跑染料(例如0.1%溴酚蓝)
操作:观察蓝色条带水平度,可排除样品问题