伯乐CFX Opus96实时荧光定量PCR系统做实验需要哪些染料

Bio-Rad伯乐CFX Opus96实时荧光定量PCR系统，您在选择染料时需要了解该仪器的核心特性。核心结论：CFX Opus96是一款支持多种检测通道的实时荧光定量PCR仪，因此它兼容市面上绝大多数常见的qPCR染料和探针。您可以根据实验需求，从以下几类染料中进行选择：

一、伯乐CFX Opus96实时荧光定量PCR仪通用型DNA结合染料

这类染料可以与任何双链DNA分子结合并发出荧光，适用于大多数基础的基因表达分析（RT-qPCR）和基因分型实验

1、特点：

成本低： 按反应次数计算，比探针法便宜很多。

使用简便： 只需在设计引物时确保扩增产物单一、特异即可。

通用性强： 一套染料可用于所有基因的检测。

2、常见选择：

SYBR Green I： 经典、常用的qPCR染料，灵敏度高。

EvaGreen： 稳定性比SYBR Green更好，在高浓度时抑制PCR效应的程度更低，尤其适合进行高分辨率熔解曲线分析。

BioRad自家的CFX Manager软件中也预置了这些染料的检测方案。

注意事项：

由于它会与所有双链DNA（包括引物二聚体和非特异性扩增产物）结合，因此对引物的特异性和PCR反应条件要求较高。数据分析时，必须进行熔解曲线分析，以确认扩增产物的单一性。

二、伯乐CFX Opus96实时荧光定量PCR序列特异性探针

这类染料通过一个与目标序列特异性结合的寡核苷酸探针来发光，特异性高。

1、特点：

特异性强： 只有存在目标序列时才会产生荧光信号，有效避免了引物二聚体等的干扰。

可进行多重检测： 使用不同荧光标记的探针，可以在一个反应管内同时检测多个靶基因。

成本较高： 需要为每个检测靶点合成特定的探针。

2、常见选择：

TaqMan 探针： 最主流的探针技术，CFX Opus96兼容。它采用FRET原理，探针一端标记报告荧光基团（如FAM, HEX, VIC, CY5等），另一端标记淬灭基团。

分子信标： 另一种形式的探针，发夹结构，特异性也很好。

FRET 探针： 使用两条相邻的探针，常用于罗氏LightCycler系统，但CFX Opus96同样可以检测。

关键点：

选择探针法时，您需要确认探针上所标记的荧光基团的激发/发射光谱是否在CFX Opus96的检测通道内。幸运的是，CFX Opus96的滤光片组非常标准，支持FAM, HEX, VIC, ROX, Texas Red, CY5等常见荧光基团。

3、其他新型染料

一些为特殊应用开发的染料也可以在CFX Opus96上使用。

HRM染料： 如LCGreen、SYTO 9等，专门用于高分辨率熔解曲线分析，进行SNP分型、突变扫描和甲基化分析。CFX Opus96是进行HRM分析的优秀平台。

双标记探针： 除了TaqMan，还有许多其他厂商提供的类似原理的双标记探针。

三、总结与选择建议

1、对于绝大多数常规实验（如检测某几个基因的表达量）： 从 SYBR Green I 或 EvaGreen 开始。且CFX Opus96对其有支持。

2、当实验对特异性要求高，或者需要在一个孔里检测多个基因时： 选择 TaqMan 探针法。您可以从各大生物公司（如Thermo Fisher, IDT, 等）订购针对您目标基因的探针。

3、如果需要做SNP分型或突变检测： 选择 EvaGreen 或其他专用的 HRM染料，并利用CFX Opus96的HRM功能。