biorad伯乐T100梯度PCR仪做实验常用的染料有哪些？

伯乐（Bio-Rad）的T100是一款非常经典和可靠的梯度PCR仪，其热盖设计使得它能够兼容多种类型的PCR管和板，因此在染料的选择上非常灵活。总的来说，用于T100 PCR仪的染料可以分为两大类：

一、伯乐T100PCR仪实时荧光定量PCR染料

这类染料在反应过程中与DNA结合并发出荧光，通过仪器实时监测荧光信号来对DNA进行定量。T100本身是普通PCR仪，不能做qPCR。但如果您是为后续在qPCR仪上进行检测而准备样品，那么您会在T100上进行qPCR反应的“扩增"步骤。常用的染料/探针包括：

1、SYBR Green I

原理：一种常用的DNA结合染料，可嵌入DNA双链的小沟中，结合后荧光信号大大增强。

优点：成本低，使用方便，无需设计探针，适用于多种实验。

缺点：特异性稍差，会与任何双链DNA（包括引物二聚体）结合，可能导致假阳性。需要通过熔解曲线分析来确认产物的特异性。

2、TaqMan 探针

原理：一种序列特异性的寡核苷酸探针，两端分别标记有报告荧光基团和淬灭基团。当PCR扩增发生时，Taq酶的5‘→3’外切酶活性会降解探针，使报告基团与淬灭基团分离，从而发出荧光。

优点：特异性高，因为只有目的片段被扩增时才会产生荧光信号。

缺点：需要针对每个靶序列设计并合成特异的探针，成本较高。

3、EvaGreen

原理：与SYBR Green I类似，也是一种结合双链DNA的染料。

优点：荧光信号更强，稳定性更好，对PCR的抑制性比SYBR Green I小，尤其适合高分辨率熔解曲线分析。

缺点：成本通常比SYBR Green I略高。

二、伯乐T100PCR仪终点法PCR检测染料

这类染料用于在PCR反应结束后，通过琼脂糖凝胶电泳来检测扩增产物。您需要将染料与PCR产物混合，然后上样跑胶。

1、GelRed / GelGreen

优点：是目前安全、敏感的核酸凝胶染料之一，其诱变毒性远低于传统的EB（溴化乙锭）。荧光信号强，背景低。

使用方式：可以添加到熔化的琼脂糖凝胶中，或者在电泳前与PCR产物直接混合。

2、SYBR Safe

优点：由赛默飞公司推出，被宣传为一种安全的EB替代品。在蓝光或紫外光下均可激发。

使用方式：同GelRed。

3、溴化乙锭

注意：EB是一种强诱变剂，有潜在的健康风险，目前不推荐使用。尽管它非常便宜且检测效果稳定，但出于安全考虑，实验室已普遍用上述 safer dyes 替代。

4、常规DNA上样缓冲液

通常含有溴酚蓝和/或二甲苯青作为指示剂，以及甘油来增加样品密度。它们本身不是DNA染料，但必须与上述DNA染料配合使用，以便于上样和监控电泳进程。

三、实用建议：

1、如果您做的是普通PCR，跑胶看结果：请选择 GelRed 或 GelGreen。它们安全、效果好，是现在的黄金标准。

2、如果您是为qPCR准备样品：请根据您的实验设计、预算和对特异性的要求，在预混液中选择 SYBR Green 或 TaqMan Probe 体系。伯乐T100可以地运行这些qPCR预混液中的扩增程序。

重要提示：无论使用哪种染料，请务必遵循您所购买的预混液或染料说明书上的推荐PCR程序和建议的染料浓度。