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这是一个非常经典和普及的qPCR平台,其耗材和试剂生态系统非常成熟。总的来说,您需要准备以下几大类:
一、赛默飞QuantStudio3实时荧光定量PCR仪核心耗材
1、微孔板
0.2 mL 96孔板:这是常用的格式。有单孔独立式和8联排管式。
材质:通常为聚丙烯,确保热传导效率和化学兼容性。
选择建议:
标准板:用于大多数实验。
光学透明封口膜:必须与板配套使用,密封板子以防止蒸发和污染。有预切割的粘性膜和热封膜两种。
8联排管:灵活性高,适合样本数量不多的实验,可以单独使用每个排管。
2、基座和托架
标准96孔基座:随仪器标配,用于放置0.2 mL的96孔板或8联排管。
96孔板透明托架:如果您使用独立的8联排管,需要将这个托架放入基座中,以固定排管的位置。
二、赛默飞QuantStudio3实时荧光定量PCR仪核心试剂
1、染料法
染料(如SYBR Green)会嵌入所有双链DNA中发出荧光,成本较低,使用简便。
推荐赛默飞品牌:
PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix:这是目前的主力产品,包含了所有必需组分(热启动Taq酶、dNTPs、缓冲液、SYBR Green染料、ROX校正染料等),即开即用,性能稳定。
SYBR™ Select Master Mix:另一款高性能的预混液,同样包含所有组分。
关键点:QuantStudio 3需要使用ROX作为被动参比染料来校正孔与孔之间的荧光信号误差。上述预混液都已包含ROX,无需额外添加。
2、探针法
使用序列特异性的探针(如TaqMan探针),特异性更高,适合多重检测。
推荐赛默飞品牌:
TaqMan™ Fast Advanced Master Mix:快速循环预混液,能显著缩短实验时间,且包含所有组分。
TaqMan™ Universal Master Mix II:经典的探针法预混液,适用性广。
关键点:除了预混液,您还需要向赛默飞或其它供应商订购针对您目标基因的特异性TaqMan探针引物套装。
三、辅助耗材与试剂
1、酶水:用于稀释引物、配制反应体系。必须是分子生物学级别,无DNA酶、RNA酶。
2、引物:针对您的目标基因设计的特异性引物。
3、模板DNA:您要定量的样品DNA,通常是反转录得到的cDNA(如果是RNA定量)。
4、实验室通用耗材:
移液器及无菌带滤芯吸头:确保精确移液和防止气溶胶污染。
微型离心机:用于离心混匀反应液。
涡旋振荡器。
冰盒:用于放置对温度敏感的试剂。
手套:防止污染。
四、最后建议:
1、新手入门:强烈建议从SYBR Green染料法开始,使用PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix 和兼容的96孔板,这是最直接、成本效益高的组合。
2、渠道:访问赛默飞世尔科技,在搜索框中输入“QuantStudio 3 consumables"或上述试剂名称,可以找到最准确的产品列表、说明书信息。