Thermo赛默飞StepOne实时荧光定量PCR系统日常怎么维护保养的？

赛默飞StepOne实时荧光定量PCR系统的日常维护保养，这里为您整理了一份详细、可操作的指南。遵循这些步骤可以显著提高实验的重复性、延长仪器寿命并减少故障。维护保养可以分为 “日常常规维护"、“周期性维护"和“特殊状况处理" 三部分。

一、赛默飞StepOne实时荧光定量PCR日常常规维护

这是最基本也是最重要的部分，主要针对可能产生污染和影响仪器性能的环节。

1、实验前：

（1）仪器外部清洁：用柔软的湿布（可蘸取少量温和的清洁剂或75%乙醇）擦拭仪器外壳、屏幕和键盘，去除灰尘和潜在污染物。注意：不要让任何液体流入仪器内部。

（2）检查热盖：确保热盖清洁、无残留物（如封口膜碎屑、油污等）。如果有污染，用无尘棉签蘸取75%乙醇或去离子水轻轻擦拭。

（3）准备耗材：

使用高质量、无RNase/DNase的PCR管/板。

确保反应板或八联管底部洁净、无指纹，以免影响荧光读取。

正确使用光学封膜，确保密封平整，无褶皱，防止蒸发和污染。

2、实验后：

（1）反应块清洁：

这是核心步骤！ 运行完程序，待反应块温度降至室温或以下后，打开反应块。

使用无尘棉签或压缩空气，仔细清除反应块样品槽内可能残留的灰尘、冷凝水或极少数液体溅出物。

如果发现有液体溅溢，必须立即清洁：

（2）立即用无尘棉签吸干液体。

（3）再用棉签蘸取75%乙醇擦拭污染区域。

（4）最后用干棉签擦干，并让乙醇挥发后再运行下一个程序。

（5）热盖清洁：同实验前检查，如有必要，进行清洁。

（6）台面清洁：实验结束后，清理仪器周围台面，保持整洁。

二、周期性维护

这部分维护旨在确保光学系统和温控系统的长期稳定性。

1、光学系统校准与验证

（1）光谱校准：建议每3-6个月进行一次，或者在更换了不同品牌的耗材/染料、移动仪器后、或发现信号基线异常时进行。

操作：在电脑软件界面中，选择“Tools" -> “Calibration" -> “Spectral Calibration"。按照屏幕提示，放入空的、洁净的适配板，运行校准程序。校准时务必关闭实验室灯光，避免光线干扰。

（2）荧光校准：使用ROX参考染料时，系统通常会自动进行。如果实验方案要求精确的ROX校正，可定期运行厂家提供的校准板进行验证。

2、背景信号检测

定期运行一个空反应（只加水或缓冲液）的程序，检测各通道的背景荧光值。这有助于判断反应块或光学组件是否存在污染或性能衰减。

3、运行性能验证

使用已知浓度和扩增效率的DNA样本（如赛默飞提供的性能验证试剂盒），定期运行qPCR实验，检查Ct值的重复性、标准曲线的斜率和R2值，确保仪器整体性能达标。

4、深度清洁

对反应块、热盖和仪器内部不易触及的区域进行清洁。在进行深度清洁前，请务必关闭仪器电源并拔掉电源线。

三、特殊状况处理

1、污染处理：

核酸污染：如果怀疑由气溶胶导致的PCR污染，需要对实验室环境和工作台进行去污染处理（如使用DNA/RNA清除剂）。同时，对仪器反应块和热盖用DNA/RNA清除剂擦拭，然后用75%乙醇擦拭以去除残留。

荧光染料污染：如果发生染料泄漏，立即用棉签和75%乙醇清洁，防止染料干涸后难以清除并影响荧光检测。

2、软件与数据备份：

定期更新仪器固件和软件至新版本，以获取性能优化和漏洞修复。

定期备份实验数据和仪器设置，防止数据丢失。