赛默飞steponeplus实时荧光定量PCR仪需要使用哪些耗材和试剂？

赛默飞StepOnePlus实时荧光定量PCR仪所需的耗材和试剂。总的来说，可以分为两大部分：核心耗材（仪器运行必需） 和 反应试剂（实验成功必需）。

一、赛默飞StepOnePlus实时荧光定量PCR核心高耗材

1、反应板

这是承载PCR反应体系的容器，必须与仪器适配。

（1）96孔板：常用的规格，与StepOnePlus的标准模块匹配。

推荐品牌：赛默飞原厂的 MicroAmp™ Fast 96-Well Reaction Plate (0.1 mL) 是选择，光学性能良好。

其他兼容品牌：也可以选择其他品牌的兼容96孔板，但必须确保是光学平盖或光学凸盖，并且材质能承受快速升降温。

（2）0.2 mL单管或八联管

如果您需要更高的灵活性或通量不高，可以使用0.2 mL的单管或八联管，并配合相应的96孔板架。

推荐：赛默飞原厂的 MicroAmp™ 8-Tube Strips 和 MicroAmp™ Clear Adhesive Film。

2、封板膜

用于密封反应板，防止样品蒸发和交叉污染。至关重要，密封不严会导致实验失败。

（1）光学透明粘性封膜：常用的一种，适用于绝大多数实验。

推荐：赛默飞原厂的 MicroAmp™ Optical Adhesive Film。

（2）热封膜：使用专门的封膜机进行热封，密封效果好，但需要额外设备。

重要提示：StepOnePlus是一款块状基因扩增仪，它不能使用平板式离心机进行离心。如果需要对封膜后的板进行离心，必须使用专为96孔板设计的掌上离心机。

二、反应试剂

这部分是进行荧光定量PCR反应本身所需的化学物质。

1、核心反应混合物

这是PCR反应的主体，通常以2x预混液的形式提供，包含了DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等。

（1）SYBR Green法：如果您使用SYBR Green染料法进行检测。

推荐：赛默飞原厂的 PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix 性能非常出色。其他如 Power SYBR™ Green PCR Master Mix 也是经典选择。

（2）TaqMan探针法：如果您使用水解探针法进行检测。

推荐：赛默飞原厂的 TaqMan™ Fast Advanced Master Mix 或 Universal Master Mix II。

2、引物和探针

（1）SYBR Green法：需要针对您的目标基因设计并合成特异性引物。

（2）TaqMan探针法：需要针对您的目标基因设计并合成特异性引物和标记了荧光基团（如FAM）和淬灭基团（如TAMRA/MGB）的探针。

3、模板DNA/cDNA

您要检测的样品，例如从细胞、组织中提取的基因组DNA，或由RNA反转录得到的cDNA。

4、无核酸酶水

用于稀释和调整反应体系体积。

三、总结清单

为了方便您准备，这里是一个简洁的清单：

1、核心耗材

96孔反应板 (0.1 mL)：承载PCR反应液，必须光学透明

光学透明粘性封膜：密封反应板，防止蒸发和污染

(可选) 0.2 mL 八联管 & 管架：提供更灵活的实验方案

2、反应试剂

qPCR预混液 (2X Master Mix) ：PCR反应核心组分，根据染料法或探针法选择

引物 (Primers) ：特异性扩增目标片段

(探针法) 荧光探针：特异性检测并报告目标片段扩增

模板DNA/cDNA：待检测的样品。