thermo赛默飞QuantStudio3实时荧光定量PCR系统需要使用哪些耗材和试剂？

赛默飞世尔科技的QuantStudio™ 3实时荧光定量PCR系统是一款经典的96孔基础型qPCR仪，其耗材和试剂选择非常成熟和广泛。总的来说，您需要准备以下几大类：

一、赛默飞QuantStudio3实时荧光定量PCR核心耗材

1、反应板/板膜组合

QuantStudio 3是96孔标准模块，因此您需要选择96孔的板子和对应的密封膜。赛默飞提供了多种选择以适应不同的实验需求和预算：

（1）微孔板：

标准96孔板： 常用的类型，例如 MicroAmp™ Fast Optical 96-Well Reaction Plate (货号： 4346906)。

光学级96孔板： 确保良好的光学性能，减少信号交叉干扰。

（2）密封膜：

光学平盖膜： 与大多数试剂兼容，需要专用的压膜工具密封，密封性好。例如 MicroAmp™ Optical Adhesive Film (货号： 4311971)。

八联管盖： 如果您使用八联管，则需要匹配的管盖。例如 MicroAmp™ Optical 8-Cap Strip (货号： 4323032)。八联管的好处是可以在部分孔中进行实验，灵活性高。

二、赛默飞QuantStudio3实时荧光定量PCR核心试剂

qPCR试剂是反应发生的化学基础，主要分为两大类：染料法和探针法。

1、预混液

这是常用、方便的形式，已将DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等组分预先混合好，用户只需加入引物、模板和水即可。

（1）SYBR Green法（染料法）：

PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix (货号： A25742)： 性能优异，含有ROX染料校正，适合大多数应用。

SYBR™ Green PCR Master Mix： 经典选择。

特点： 经济、通用性强，但特异性略低于探针法，需要配合熔解曲线分析来确认产物的单一性。

（2）TaqMan法（探针法）：

TaqMan™ Fast Advanced Master Mix (货号： 4444557)： 快速、灵敏，是进行探针法qPCR的重要选择。

特点： 特异性高，适用于多重检测（同时检测多个目标基因），但成本较高，需要针对特定基因序列设计并合成探针。

2、关键组分

如果您不使用预混液，则需要自行配制体系，包括：

热启动Taq DNA聚合酶

dNTPs

缓冲液

镁离子

荧光染料 或 探针

对于绝大多数用户，直接购买预混液是高效、可靠的选择。

三、其他辅助耗材与试剂

1、样品制备阶段：

（1）RNA/DNA提取试剂盒： 如 Invitrogen™ PureLink™ 系列。

（2）无核酸酶水： 用于稀释和配制反应体系。

（3）RNase抑制剂： 如果进行RT-qPCR，用于防止RNA降解。

2、液体操作：

（1）无滤芯吸头： 用于移取模板、引物等。

（2）带滤芯吸头： 强烈推荐用于移取预混液，可防止气溶胶污染和交叉污染。

（3）PCR管/板： 用于配制主混合物。

3、逆转录试剂（用于RT-qPCR）：

如果您是从RNA开始实验，需要先将RNA逆转录成cDNA。例如 SuperScript™ IV First-Strand Synthesis System。

四、总结与工作流程示例

一个典型的SYBR Green RT-qPCR实验流程所需清单如下：

1、RNA提取： RNA提取试剂盒、无RNase的离心管和吸头。

2、逆转录： 逆转录酶、随机引物/ Oligo dT、dNTPs、RNase抑制剂、无核酸酶水。

3、qPCR反应体系配制：

（1）试剂： PowerUp? SYBR? Green Master Mix、基因特异性引物、无核酸酶水、cDNA模板。

（2）耗材： 96孔反应板、光学粘封膜、带滤芯的吸头、用于配制主混合物的离心管。

4、上机运行： 将密封好的反应板放入QuantStudio 3中，设置程序并运行。