thermo赛默飞Qubit4.0荧光计正确合理使用方法是什么？

这是一台高精度、专门用于定量dsDNA、RNA、蛋白质等微量核酸和蛋白的仪器。正确使用不仅能获得准确可靠的数据，还能延长仪器的使用寿命。以下将从操作流程、关键注意事项、日常维护和常见问题四个方面进行详细说明。

一、赛默飞Qubit4.0荧光计标准操作流程

1、开机预热：

连接电源，按下仪器后方开关启动。

仪器会进行自检。让仪器预热至少10-15分钟，以确保光源稳定，这是获得准确数据的关键一点。

2、选择 assay 类型：

在触摸屏主界面选择“新测定"。

从列表中选择您要检测的样本类型，例如 “dsDNA HS (高灵敏度)" 。仪器会自动匹配所需的试剂盒和标准曲线。

3、准备标准品（强烈推荐！）：

虽然Qubit使用存储的默认标准曲线，但为了获得MAX 精度，特别是对于极其关键的样本，建议使用试剂盒配套的标准品进行校准。

取两个0.5mL的Qubit专用试管，分别标记为“S1"和“S2"。

按试剂盒说明书要求，向每个试管中加入190 μL的缓冲液和10 μL的标准品（S1和S2），充分混匀。总体积为200 μL。

注意：对于RNA和Protein assay，标准品的加入量可能不同，请务必查阅对应试剂盒的说明书。

4、准备样品：

取0.5mL Qubit专用试管，进行标记。

加入199 μL的缓冲液和1 μL的待测样本（对于DNA HS assay），充分混匀。总体积同样为200 μL。

重要：样本浓度需落在该assay的检测范围内（如DNA HS: 0.2 - 100 ng）。如果样本浓度过高，需用缓冲液（Buffer） 进行稀释，而不是用水，否则会破坏荧光信号的产生环境。

5、进行检测：

将试管盖紧，用无尘纸擦拭干净管壁，避免指纹或液体影响光路。

在主界面点击“读取标准品"，先放入S1，点击“读取"，再放入S2，点击“读取"。校准完成后，界面会显示“标准曲线已就绪"。

选择“运行样品"，依次放入准备好的样本管，点击“读取"。仪器会直接显示浓度值（如 ng/μL）。

快捷操作：如果选择不使用标准品，可以直接选择“使用默认曲线"来运行样品，但精度会略有下降。

6、记录数据和关机：

数据可以手动记录，也可以通过USB接口导出报告。

完成后，取出所有试管，在主界面选择“关机"。

二、日常维护与保养

1、清洁：

日常：每次使用后，用柔软的无尘纸蘸取少量去离子水轻轻擦拭样品仓。确保仓内无液体、灰尘或纤维残留。

顽固污渍：可用70%的乙醇擦拭，但需等待乙醇挥发后再开机或放入样品管。

2、校准：建议定期使用标准品进行校准，以确保仪器的准确性。如果实验室温湿度变化较大，或仪器搬动后，也应进行校准。

3、环境：将仪器放置在稳定、洁净、干燥的实验台上，避免阳光直射和强烈的振动。

三、见问题与解决（Troubleshooting）

1、读数不稳定或波动大：

原因：试管壁不干净（有指纹、液体）、试管未放到底、气泡过多、样本未充分混匀。

解决：擦拭试管，确保放置到位，涡旋振荡混匀样本。

2、错误：“浓度过高"：

原因：样本浓度超出检测范围。

解决：用相应的缓冲液稀释样本后重新检测。

3、错误：“浓度过低"或负值：

原因：样本浓度低于检测下限，或缓冲液/水中有荧光污染物。

解决：检查使用的缓冲液是否纯净。确认检测的是否为超微量样本。

4、结果与NanoDrop或其他仪器差异大：

原因：这是正常现象。Qubit基于荧光染料特异性结合目的分子（如双链DNA），因此受盐、蛋白、游离核苷酸等杂质影响小，结果更准确反映有效浓度。而NanoDrop基于紫外吸收，任何在260nm有吸收的物质（如RNA、降解DNA、胍盐）都会干扰结果，导致虚高。

结论：Qubit的结果对于下游需要精确DNA量的实验（如NGS建库、qPCR）更具参考价值。

四、总结

正确合理的用法：

预热 → 选方法 → (建议校准) → 精确配制样品(专用管+缓冲液+准确体积) → 孵育 → 清洁上机 → 在范围内读数 → 妥善维护。

遵循以上步骤和注意事项，您就能充分发挥Qubit 4.0准确、灵敏的优势，为您的实验提供可靠的数据支持。对于使用或更换检测类型，请务必详细阅读试剂盒说明书。