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赛默飞Qubit 4.0荧光计是一款非常受欢迎的用于核酸和蛋白质精确定量的仪器。它以灵敏度和准确性而著称,特别适用于样品量珍贵或浓度较低的分子生物学应用。以下是Qubit 4.0荧光计的主要特点,分为几个核心方面进行说明:
一、赛默飞Qubit4.0荧光计核心优势:精准与灵敏
1、灵敏度与特异性:
(1)与基于紫外吸光度(NanoDrop)的测量方法不同,Qubit技术使用荧光染料,这些染料只与特定分子(如dsDNA、ssDNA、RNA、蛋白质)结合并发光。
(2)这意味着它几乎不受常见污染物如盐分、溶剂、游离核苷酸、蛋白质或降解核酸(RNA、ssDNA)的干扰。结果比吸光度法可靠得多,尤其对低浓度样品或粗提样品。
2、精确定量:
检测线性范围宽,能够提供高度精确的浓度值,这对于需要高精度输入量的下游应用(如NGS文库制备、qPCR、克隆)至关重要。
二、赛默飞Qubit4.0荧光计硬件与设计特点
1、直观的触摸屏界面:
配备彩色触摸屏,操作简单直观。用户可以在屏幕上直接选择检测程序、查看结果、创建标准曲线和管理数据。
2、内置协议和自动计算:
仪器预装了所有常用的Qubit检测试剂盒的标准化程序(如dsDNA HS、dsDNA BR, RNA HS, Protein等)。只需选择相应 assay,仪器会自动计算并显示浓度,无需手动计算。
3、USB数据导出功能:
轻松通过USB闪存盘导出实验结果(CSV或PDF格式),方便后续的数据分析和记录保存。
三、赛默飞Qubit4.0荧光计功能与性能特点
1、多浓度范围选择:
针对同一种分子类型,提供高灵敏度(HS)和宽范围(BR)两种检测模式。例如:
dsDNA HS:适用于0.2-100 ng的样品,是常用的模式。
dsDNA BR:适用于2-1000 ng的样品,适用于较高浓度样品,无需稀释。
2、免洗检测技术:
使用专用的Qubit检测管(0.5 mL)。整个检测过程无需清洗或擦拭比色皿,只需将200μL左右的 working solution 加入管中,读数即可,极大减少了操作步骤和潜在误差。
3、稳定的长期性能:
采用LED光源和滤波器系统,而非昂贵的激光器。LED光源寿命更长,更稳定,维护成本低,确保了仪器长期的可靠性。
四、结论:
1、赛默飞Qubit 4.0的核心特点在于其精准、特异和灵敏。它并非要取代NanoDrop,而是作为其互补技术。在分子生物学实验室中,常见的做法是:
2、用 NanoDrop 进行快速初步检查(查看样品是否有降解、污染大致情况)。
3、用 Qubit 4.0 进行精确定量,以确保下游实验(如NGS)使用准确数量的样品,实验成功率。
4、因此,Qubit 4.0是现代分子生物学实验室,特别是从事下一代测序(NGS)、实时荧光定量PCR(qPCR)等高级应用工具。