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在PCR(聚合酶链式反应)生物实验中,常用的染料根据用途主要分为以下几类:
一、核酸电泳染色染料(用于检测PCR产物)
1、溴化乙锭(Ethidium Bromide, EtBr)
传统的核酸染料,与DNA结合后在紫外光下发出橙红色荧光。
注意:有潜在致癌性,需谨慎操作。
2、SYBR系列染料(如SYBR Green I/SYBR Gold)
灵敏度高于EtBr,更安全(但仍需防护),需避光保存。
SYBR Green I也常用于实时荧光定量PCR(qPCR)。
3、GelRed/GelGreen
安全性更高(无诱变性),灵敏度与EtBr相当,需紫外或蓝光激发。
其他替代染料:如SYBR Safe、EvaGreen(也可用于qPCR)等。
二、实时荧光定量PCR(qPCR)染料
1、SYBR Green I
非特异性结合双链DNA,通过荧光强度定量产物,需配合熔解曲线分析。
2、EvaGreen
类似SYBR Green,但荧光信号更强,适用于高分辨率熔解曲线分析(HRM)。
3、探针类染料(需特异性设计探针)
TaqMan探针:基于荧光共振能量转移(FRET),标记报告基团(如FAM)和淬灭基团。
分子信标(Molecular Beacon):发夹结构探针,特异性高。
三、其他辅助染料
1、Loading Dye(上样缓冲液染料)
如溴酚蓝(Bromophenol Blue)或二甲苯青(Xylene Cyanol),用于电泳时指示迁移进度。
2、DNA ladder标记染料
预染的DNA分子量标准(如预混SYBR Green或EtBr)。
根据实验需求(如常规检测、定量、安全性等)选择合适的染料即可。