赛默飞NanoDropOneC操作使用流程

赛默飞（Thermo Scientific）NanoDrop One/OneC 微量紫外-可见分光光度计的技术使用说明，涵盖仪器操作、测量步骤、注意事项及维护要点：

一、赛默飞NanoDrop One C仪器简介

NanoDrop OneC 是一款用于微量样本（0.5-2 μL）的紫外-可见分光光度计，无需比色皿，直接测量核酸、蛋白质、细胞培养物等的浓度和纯度（如A260/A280比值）。

核心功能：

检测核酸（DNA/RNA）、蛋白质（Bradford/Lowry/BCA法）、细胞密度（OD600）等。

波长范围：190-850 nm（紫外-可见光）。

样本体积：0.5-2 μL（无需稀释）。

二、操作步骤

1、开机与初始化

开机：连接电源，按下仪器正面电源键，启动配套软件（NanoDrop One）。

初始化：

打开软件后，仪器自动进行光源校准和基线校正（约1分钟）。

确保测量 pedestal（检测臂）清洁无残留（用无尘纸蘸蒸馏水擦拭）。

2、选择检测模式

在软件界面选择检测类型：

核酸（Nucleic Acid）：DNA/RNA浓度（A260）及纯度（A260/A280、A260/A230）。

蛋白质（Protein）：A280或其他波长（如Bradford法测595 nm）。

其他应用（如OD600、用户自定义波长）。

3、空白校正

抬起检测臂，在上下 pedestal 各加1-2 μL空白溶液（如蒸馏水、缓冲液）。

放下检测臂，点击软件中的“Blank"按钮，完成基线校正。

4、样本测量

抬起检测臂，用无尘纸清洁 pedestal。

加1-2 μL样本至下 pedestal（避免气泡），放下检测臂。

点击“Measure"读取数据，软件自动显示浓度、吸光度和比值。

测量后立即清洁 pedestal，防止交叉污染。

5、数据保存与导出

数据自动保存至软件，可导出为Excel/CSV格式。

支持生成报告（PDF）或直接打印。

三、关键注意事项

1、样本要求：

样本需透明、无颗粒（避免散射光干扰）。

高浓度样本可能导致信号饱和（DNA/RNA > 3700 ng/μL时需稀释）。

2、清洁维护：

每次测量前后用无尘纸蘸蒸馏水或70%乙醇清洁 pedestal。

避免使用丙酮等腐蚀性溶剂。

3、校准与质控：

定期使用NIST标准参考物质（如SRM 2082）验证准确性。

若基线漂移，重新执行空白校正。

4、常见问题：

误差来源：样本残留、气泡、 pedestal 污染。

A260/A280异常：蛋白质污染（比值<1.8）或苯酚残留（比值>2.0）。

NanoDrop OneC 通过微量样本快速检测，适用于实验室常规浓度分析。操作时需严格注意清洁和校准，以确保数据准确性。对于高通量需求，可搭配自动化模块（如8联板适配器）。