赛默飞abi7500实时荧光定量PCR仪操作方法

赛默飞（Thermo Fisher）7500实时荧光定量PCR仪（7500 Real-Time PCR System）的基本操作使用方法，供参考：

一、开机准备

1、仪器检查

确认电脑与7500主机连接正常，电源线、数据线无误。

检查散热模块（如风扇）无遮挡。

2、开机顺序

先打开电脑，待系统启动后，再开启7500主机电源（主机开关位于背面或侧面）。

3、启动软件

双击桌面上的 "7500 Software v2.x"（版本号可能不同）进入操作界面。

二、7500pcr实验设置

1、创建新实验

点击 "New Experiment"，选择实验类型（如Standard Curve、Comparative Ct等）。

设置反应体积（通常为20-50 μL）和检测通道（FAM/SYBR Green, VIC/HEX等）。

2、设置反应板布局

在软件界面中点击板图（Plate Layout），右键选择样品类型（标准品、待测样品、阴性对照等）。

输入样品名称、浓度（标准品需设置梯度）和重复数。

3、设置PCR程序

预变性阶段：95℃, 10分钟（激活热启动酶）。

扩增循环（40-45个循环）：

变性：95℃, 15秒

退火/延伸：60℃, 1分钟（温度根据引物TM值调整）。

熔解曲线阶段（SYBR Green实验需添加）：

95℃→60℃→95℃，缓慢升温（如0.3℃/秒）。

三、加样与上机

1、准备反应体系

按试剂盒说明书配制Master Mix（含酶、dNTPs、缓冲液等），加入模板DNA和引物/探针。

混匀后分装至96孔或384孔反应板，避免气泡。

2、放置反应板

将反应板放入仪器样品槽，确保孔位方向与软件板图一致。

关闭仪器盖，确保密封。

四、运行程序

1、启动运行

在软件中点击 "Start Run"，确认反应板信息和程序无误后提交。

仪器将自动运行温控和荧光信号采集。

2、实时监控

在运行过程中可查看扩增曲线、荧光阈值（Threshold）和基线（Baseline）设置。

五、数据分析

1、查看结果

运行结束后，软件自动生成扩增曲线、熔解曲线（如设置）和Ct值。

调整基线范围（通常为3-15个循环）和阈值线至指数扩增期。

2、导出数据

点击 "Export" 导出Ct值、荧光数据为Excel或文本格式。

使用软件内置工具或第三方软件（如GraphPad）进行相对定量（ΔΔCt法）或绝对定量（标准曲线法）。

六、关机与维护

1、关机顺序

先关闭软件，再关闭7500主机电源，最后关闭电脑。

2、清洁维护

定期用70%乙醇擦拭样品槽表面，避免污染。

每月运行一次仪器自检程序（可在软件中找到）。

如需更详细的操作步骤，建议参考 《Thermo Fisher 7500 User Manual》 或参加培训。不同实验（如基因表达分析、SNP检测）可能需要调整具体参数。